煙草在線據中國農科院煙草所網站報道 為積極追蹤科學技術前沿,努力強化團隊成員業務水平,8月2日,中國農科院煙草所栽培與調制創新團隊特邀羅氏生命科學應用技術部資深工程師傳授“熒光定量PCR實驗技術”。
工程師系統全面地介紹了熒光定量PCR的技術原理、應用領域、操作規范、分析方法、注意事項及常見問題,針對團隊研究任務,就如何做好實驗設計、方法選擇、條件優化等進行了系統講解和互動交流,并通過最新發表的煙草相關實驗案例分析和現場實驗演示,進一步強化大家對該技術的理解。
大家一致認為,本次培訓設計科學、深入淺出、針對性強,使參訓人員系統地掌握了熒光定量PCR的基礎技術,了解了該技術的應用前沿與發展動態,掌握了實驗條件優化方法,規范了實驗操作,為更好地解決實驗中存在的問題,更準確地獲得科學的實驗結果奠定了良好的基礎。
延伸閱讀
熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術,該技術通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,用相應軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。
熒光定量PCR技術以Taqman熒光探針為基礎,Taqman熒光探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個熒光發射基團和一個熒光淬滅基團(常用熒光基團是FAM, TET, VIC, HEX)。探針完整時,發射基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使熒光發射基團和熒光淬滅基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步,從而實現定量。
熒光定量PCR的出現,極大地簡化了定量檢測的過程,而且真正實現了絕對定量。多種檢測系統的出現,使實驗的選擇性更強。自動化操作提高了工作效率,反應快速、重復性好、靈敏度高、特異性強、結果清晰。隨著生物芯片技術和熒光探針定量技術的結合,熒光定量PCR在各個領域應用前景廣闊。
篤行致遠 2024中國煙草行業發展觀察