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云南煙草花葉病為TMV-U1株系可用一個特異性抗體檢測

2014年03月03日 來源:煙草在線據云南煙葉信息網報道 作者:
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  煙草在線據云南煙葉信息網報道  云南省煙草農業科學研究院與云南省農業科學院生物技術與種質資源研究所合作完成的“云南煙草中煙草花葉病毒株系比較與分析”研究發現,云南煙草花葉病樣分離物均屬于TMV-U1株系,各地的煙草TMV外殼蛋白在空間結構上一致,認為可通過制備一個分離物的特異性抗體用于不同區域病毒的檢測。該結果發表在《中國煙草學報》2013年第6期上。

  煙草花葉病毒(TMV)是煙草花葉病毒屬的代表種,該病毒具有較廣的寄主范圍,可侵染包括30個科的310多種植物。TMV基因組全長6395nt,為單鏈正義RNA,基因組共編碼4個ORF,其中外殼蛋白基因(CP)是病毒分類相關基因。在不同的寄主上TMV有許多株系,在我國主要有TMV-U1、TMV-U2、番茄株系、車前草株系、豆類株系、葫蘆科株系和蘭花株系;煙草上的株系主要有TMV-OM、TMV-U1、TMV-Vulgare、TMVRS、TMVC、TMVN、TMVY。煙草花葉病主要通過汁液傳播,近年來,由于煙葉生產上廣泛應用漂浮育苗技術,加大了機械傳毒的機率,由TMV引起的花葉病發生嚴重,而對花葉病病毒株系尚不清楚。為此,該項研究通過采集云南煙草種植區的TMV病樣,對不同地區的TMV外殼蛋白基因進行比較,以為TMV的防控及快速檢測方法的研究提供科學依據。

  該研究利用TAS-ELISA方法(三抗體夾心酶聯免疫吸附測定)對采自云南不同煙草種植區的710份花葉病樣進行檢測,結果有546份樣品與TMV抗體呈陽性應。據此根據地理分布的差異,選擇了38個代表性分離物進行TMV外殼蛋白基因的IC-RT-PCR擴增、克隆和測序,結果發現,38個TMV cp基因核苷酸序列相似性在95%~100%之間,其推導的氨基酸序列同源性為97.5%~100%。該研究還發現,云南不同TMV分離物TMV-U1、TMV-福建核苷酸相似性大于90%,系統進化關系也顯示云南不同分離物與TMV-U1株系、TMV福建分離物聚為一支。據此推斷,云南38個草分離物均屬于TMV-U1株系。

  該研究以38個分離物在氨基酸序列上的差異將其分成12組;再分別繪制12組蛋白質親疏水性序列普發現,12組序列普分成兩類;又分類進行蛋白質結構的同源性建模,結果顯示,兩類蛋白質建模的基本模型均為3kmlK(3.01A),且與模型的同一性分別為97.802% 和98.901%,因此判斷兩類蛋白質為同一空間結構的蛋白。研究還發現,云南各地煙草上TMV的外殼蛋白在空間結構上一致,其免疫原特性沒有差異,可通過制備一個分離物的特異性抗體用于不同區域病毒的檢測。

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