煙草在線據云南煙葉信息網站報道　　河南農業大學煙草學院楊惠娟等人對打頂前后烤煙葉片microRNAs表達差異研究認為，打頂可能通過調控相關miRNA的表達來影響烤煙葉片的生長狀態和對脅迫信號的敏感程度。該成果為研究烤煙打頂對葉片生長的分子調節過程提供研究線索。該結果發表在《中國煙草學報》2014年第5期上。

　　microRNAs（微小RNAs，miRNAs）作為基因表達中的一類負調控子，主要在轉錄后水平上通過介導目標mRNA的切割或抑制翻譯來調節植物基因的表達。植物miRNA介導的調控主要取決于植物miRNA與其靶mRNA的序列互補的程度。通常情況下，miRNA與靶mRNA完全互補或接近完全互補時，則會切割　mRNA；miRNA與靶mRNA不完全互補時，則抑制它的翻譯。而植物　miRNA　介導的主要作用方式是對靶mRNA的剪切。切割后，miRNA　會繼續識別并切割其他靶基因。

　　一個miRNA可作用于多個mRNA，如miR159可同時調控TCP2、CP3、TCP4、CP10、TCP24和GAMYB等靶基因的表達，而一個mRNA也可能受到多個不同miRNA的調節，如SCL6同時受到miR30、miR46和miR58等的調節。miRNA在植物體中的表達水平受到外界環境、激素、發育進程等多種因素的影響。miRNA在植物根分化、葉片發育、莖尖形成、開花與性別分化等過程中均有重要作用。

　　楊惠娟等人利用Solexa測序技術對打頂前后K326葉片的小RNA文庫進行測定，分別得到4，223，982和4，993，588條unique　sRNA序列讀數。打頂前后葉片樣品中分別347條與337條序列與庫中miRNA匹配，其中注釋序列分別為83和71條。在打頂前后葉片樣品中表達具有顯著差異的miRNA有7條，在打頂后葉片中高表達的miRNA有miR-157和miR-156；在打頂后葉片中低表達的miRNA有miR-395，miR-159c，miR-159a，miR-394和miR-399。實驗還鑒定出3條新的miRNA序列，其中Nta-miRNA*-001和Nta-miRNA*-002存在打頂前葉片樣品中，Nta-miRNA*-003存在打頂后葉片中。

　　該研究發現，miR156在打頂后煙草葉片中表達量較高，在打頂后葉片中miR156的轉錄增加將有利于加強煙株的營養生長而延緩生殖生長的進程。證明打頂在控制了煙株的生殖生長后確實對葉片的生長起到了促進作用，而miR156上調則是其中的調節機制之一。

　　該研究還發現，打頂后葉片下調的miRNA有miR-395，miR-159c，miR-159a，miR-394和miR-399。這些下調的　miRNA除miR-394功能不明外，其余的都與植物抗性脅迫有關。其中miR159與脫落酸（ABA）信號轉導過程有關，miR159過量表達可以降低植物對ABA的敏感性。miR159在甘蔗抗鹽應激過程中也發揮了重要作用。miR399可調控磷的吸收和轉運，在受到低磷脅迫下其表達量增加，使其靶基因表達量降低，從而提高了磷的積累，低硫可以誘導miR395的表達量升高。打頂導致這些與抗逆脅迫相關　miRNA的表達量降低，表明打頂在引起煙草葉片自身生長狀態改變的同時也改變了葉片對營養脅迫的反應及對激素信號的敏感程度。

注：紅色點代表在打頂后葉片中上調的miRNA，綠色點代表在打頂后葉片中下調的miRNA，藍色點代表表達量無顯著差異miRNA。

打頂前后葉片miRNAs的表達水平（圖片說明）

　　該研究認為，烤煙打頂可使葉片中的miR-157和miR-156上調，可能是打頂影響煙株的生殖生長和營養生長的調節機制之一。打頂后烤煙葉片下調的miRNA　有　miR-395、miR-159c、miR-159a、miR-394和　miR-399，除　miR-394功能不明外，其余都與植物抗性脅迫有關。表明打頂可能通過調控相關miRNA的表達來影響煙葉生長狀態和對脅迫信號的敏感程度。